Reproductive parameters of Bos taurus and Bos indicus bulls during different seasons in tropical conditions: focus on an alternative approach to testicular assessments using ultrasonography.

The aim of the present study was to evaluate the reproductive status of Bos taurus and Bos indicus bulls during different seasons when bulls were in a tropical environment focusing on systematic assessment of the testes using B-mode ultrasonography and ImageJ software to evaluate the testicular parenchymal tissues. The experimental design is a 2 × 2 factorial arrangement, with breed (Bos Taurus - Simmental; Bos indicus - Nellore) and season (summer; winter) as factors. Testicular ultrasonic evaluation and conventional semen analysis were performed. The Simmental bulls had more major sperm defects than Nellore bulls in the summer (P = 0.0001). Additionally, Simmental bulls had a greater percentage of major sperm defects during the summer than winter months P = 0.045). Furthermore, Nellore bulls had a greater testicular parenchyma echogenicity, with a greater grayscale, (caudal parenchyma, P = 0.0155; cranial parenchyma, P = 0.001) and mediastinum grayscale than Simmental bulls (Nellore = 52.32 ± 03.60; Simmental = 35.72 ± 03.67; P = 0.003). Simmental bulls also had a greater testicular lesion area (P = 0.0147). Results indicated there was susceptibility to heat stress when Simmental bulls were maintained in tropical regions. The results of the present study indicate there is an association between results when there was use of conventional andrological evaluation procedures and results from ultrasonic analysis using ImageJ software that allows for earlier identification of tissue aberrations that could lead to impaired semen quality and fertility.

Frozen Jaguar (Panthera onca) sperm capacitation and ability to penetrate zona free hamster oocytes / Capacitação espermática de sêmem congelado de onça pintada (Panthera onca) e ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida

Assisted reproductive technologies in endangered species, such as artificial insemination, in vitro fertilization and embryo transfer, can be viewed as one potential approach for safeguarding species. Toward this aim, the objective of this study was to evaluate the fertility of frozen jaguar (Panthera onca) sperm and Tyrod's Talp PVA capacitation medium using the hamster zona free oocyte penetration assay. Ejaculates were collected from nine animals using electroejaculation and cryopreserved. Sperm capacitation was performed by swim-up technique using Tyrod's Talp PVA medium at room temperature. Penetration was considered when the spermatozoa head decondensation was visualized within the oocyte. This assay showed 15.4 % penetrations (350/2275 oocytes). Results of this study showed high sperm abnormalities, low sperm quality after cryopreservation, and low percentage of penetrations. However, the penetration results showed lhat the cryopreserved jaguar's semen can be used for artificial insemination, in vitro fertilization and intra cytoplasmatic sperm injection, supporting the semen bank creation for this specie.

Biotecnologias reprodutivas aplicadas a espécies selvagens, como inseminação artificial, fertilização in vitro e transferência de embriões, são vistas como um potencial caminho para proteção das espécies ameaçadas de extinção. Devido a isso, o objetivo deste estudo foi avaliar a fertilidade do sêmen congelado de onças pintadas (Panthera onca) e o meio de capacitação espermática usando o ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Ejaculados de nove animais foram coletados por eletroejaculação e criopreservados. Para determinar a capacitação espermática foi utilizada a técnica swin-up com meio Tyrods Talp PVA a temperatura ambiente. No ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida foram considerados como oócitos penetrados aqueles que apresentaram em seu interior a cabeça do espermatozóide descondensada. O ensaio foi realizado em um total de 2275 oócitos, dos quais 350 apresentaram em seu interior a cabeça do espermatozóide descondensada, perfazendo um total de 15.4% de penetração. Os resultados deste estudo demonstraram alto índice de anormalidades espermáticas, baixa qualidade do sêmen e baixa porcentagem de penetrações. Entretanto, os resultados de penetração espermática demonstraram que sêmen congelado de onça pintada poderá ser utilizado para inseminação artificial, fertilização in vitro e injeção intracitoplasmática dando suporte para a criação de um banco de sêmen para esta espécie.

Citologia aspirativa por agulha fina (CAAF), em testículo de onça pintada (Panthera onca), utilizada como ferramenta no diagnóstico de infertilidade / Testicular fine needle aspiration cytology as a diagnostic tool in jaguar (Panthera onca) infertility

Técnicas de biópsia, caracterizadas pela remoção de segmentos de órgãos e tecidos para análise histopatológica, não são indicadas no auxílio diagnóstico de alterações testiculares para animais ameaçados de extinção, por não serem totalmente isentas de riscos. Neste sentido, é de grande interesse que se desenvolvam técnicas de biópsia testicular cada vez mais seguras e com o mínimo de conseqüências negativas. Com este intuito três onças pintadas (Panthera onca) foram submetidas a exames de Citologia Aspirativa por Agulha Fina (CAAF). Amostras foram obtidas através da punção aspirativa dos testículos, esfregaços foram confeccionados, corados com Panótico e analisados sob Microscopia Optica. Simultaneamente foram realizadas coletas de sêmen para avaliação do volume, pH, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto à avaliação espermática, os animais apresentaram valores semelhantes aos encontrados na literatura quanto ao volume, pH, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto a concentração espermática os animais apresentaram valores abaixo dos encontrados na literatura. Nos exames de CAAF, todas as gerações de células germinativas foram identificadas, indicando espermatogênese normal em todos os animais, com exceção das espermátides finais duplas que ainda não foram relatadas como achados em punções testiculares de outras espécies, o que vem confirmar a elevada porcentagem de células teratológicas encontradas nesses animais. Desta forma, podemos concluir que a CAAF testicular é um método diagnóstico auxiliar importante na detecção de alterações testiculares em casos de sub ou infertilidade, podendo ser utilizados na rotina de investigação do trato reprodutivo masculino, quando o exame histopatológico, por ser um método altamente invasivo, é desaconselhável

Avaliaçäo da capacidade de penetraçäo de sêmen congelado de onça pintada (Panthera onca) em oócitos heterólogos / Penetration assay of frozen jaguar (Panthera onca) sperm in heterologous oocytes

A aplicaçäo de técnicas de reproduçäo assistida em espécies selvagens ameaçadas de extinçäo surge como método alternativo com o intuito de minimizar a diminuiçäo da variabilidade genética das populaçöes. Com o objetivo de determinar a fertilidade de onças pintadas (Panthera onca) mantidas em cativeiro e avaliar a eficácia dos meios de capacitaçäo espermática, foi realizado o ensaio de penetraçäo em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Para a realizaçäo do experimento, foi utilizado sêmen congelado de 3 animais do Bosque dos Jequitibás, Campinas/SP. Foram testadas 3 técnicas: Percoll, Swim-up e Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38§C, considerando como oócitos penetrados aqueles que apresentaram no seu interior a descondensaçäo da cabeça do espermatozóide. A média de penetraçöes da técnica Percoll (26,5 por cento) foi significativamente maior comparada à técnica Swim-up (8,1 por cento), sendo que näo houve penetraçäo utilizando a técnica Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38ºC (x2 = 19,93; p < 0,05). Analisando os resultados, concluímos que as técnicas Percoll e Swim-up foram eficientes para a realizaçäo do ensaio de penetraçäo, comprovando a capacidade de penetraçäo dos espermatozóides de onças pintadas (Panthera onca), pós-descongelamento, em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Porém, houve uma baixa porcentagem de penetraçäo, a qual pode estar associada ao elevado índice de espermatozóides morfologicamente anormais. Mais estudos devem ser conduzidos com a finalidade de avaliar a fertilidade destes animais e até que ponto a variabilidade da espécie pode estar comprometida

Effect of two ram sperm capacitating media on acrosome reaction and zona-free hamster oocyte penetration test

An in vitro zona-free hamster oocyte penetration test was utilized in 24 trials in order to evaluate the capacitation media used for ram sperm. A pool of fresh semen was collected from three crossed breed rams. Two semen drops were washed by centrifugation and incubated in high ionic strength treatment (HIS) or in a defined medium with HEPES, on heat ewe serum and heparin. After the incubation to promote capacitation, simplified triple-stain technique was used to evaluate the spontaneous acrosome reaction of the capacitated sperm. Superovulation in 96 golden hamsters was induced by PMSG and hCG. The oocytes were treated with hyaluronidase and trypsin to remove, respectively, the cumulus cells and the zona pellucida. Oocytes and capacitated sperm were incubated during 3 hours for further penetration. Then, oocytes were fixed and stained, being evaluated under phase contrast microscope. No significant statistical difference (p > 0.05) was found between media, concerning the penetration rate of the capacitated sperm and between number of sperm viable with acrosome reaction after the capacitation treatment using two different media. It was concluded that both media utilized were effective in capacitating ram sperm